品簡介

本試劑盒是專門用于從血漿、全血、無細胞體液、病毒原液和感染病毒的組織中提取游離DNA的試劑盒。循環(huán) DNA 是指游離在細胞外的 DNA，它是細胞調亡產生的。循環(huán) DNA 片斷一般在 1KB 以下。試劑盒基于硅膠柱純化技術，提取過程中無需使用有毒的酚

氯仿抽提，也無需進行耗時的醇類沉淀。得到的循環(huán) DNA 可直接用于定量 PCR，液相或固

相芯片分析，雜交和 SNP 檢測等分析。

試劑盒組成

   *Protease K含有50%甘油，吸取時，移液器不能伸得太入，以免吸頭外壁帶走Protease K

儲存和穩(wěn)定性

在購買后按以下方式儲存可保存至少12個月；Protease K儲于-20℃，其它組成儲于室溫（22-25℃）。Buffer BL在低溫下可能會出現(xiàn)沉淀，加熱到37℃溶解沉淀。

實驗前準備

請詳細閱讀該手冊并熟悉各個步驟，在開始之前準備好所有的試劑盒組分和必需的器材。

操作步驟

以下操作以1000μl 液體樣品為例，更大的樣品處理量，請將試劑按比例增加。更多的試劑需另外購買。

1.取1000μl 血清、血漿或者其他無細胞液體樣品置于2ml離心管中。

2.加入1000μl Buffer BL 、20μl Protease K，最高速度渦旋15秒充分混勻。

3.65℃水浴10分鐘。孵育過程中短暫渦旋管子一次。

4. 加入1000ul無水乙醇（96-100%，室溫）至裂解液中，最高速度渦旋20秒混勻。將柱子稍微離心以收集蓋子上的液滴。

5. 把GBC吸附柱裝在在2ml收集管中（已提供），取第4步得到的溶液700μl轉入柱中，10,000×g離心30秒，倒棄流出液重新套上收集管。

6.重復第五步，直至第四步的所有溶液過柱完畢。

溫馨提示：第五、六步建議用真空泵替代離心操作，濾過更快。

7.加入500μl Buffer WB至柱子中，10,000×g離心30秒，棄去流出液。

注意：Buffer WB使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中，使用前須恢復到室溫。

8. 將GBC吸附柱重新套回2ml收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；

注意：DNA Wash Buffer使用前須要用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中，使用前須恢復到室溫。

9.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g離心1min,棄去流出液；

10. 將GBC吸附柱重新套回2ml收集管中，最大轉速（>13.000×g）離心空結合柱1min以干燥柱子的基質；這一步對下面的洗脫步驟至關重要。

11. 將柱子置于1.5ml滅菌離心管，加入50-100μl TE或滅菌去離子水至柱子的膜中央，室溫靜置于2min；

12. 室溫下，離心(>13.000)1min，以洗脫DNA。保留含DNA流出液。將DNA儲于-20℃。

注意：為增加得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱中，室溫放置2分鐘，1,2000rpm離心2分鐘。