活性氧(ROS)檢測試劑盒（紅色熒光）
更新：2023/10/11 9:16:43
| 中文名： | 活性氧(ROS)檢測試劑盒（紅色熒光） | 說明書下載 | 暫無 |
| 英文名： | Reactive Oxygen Species Assay Kit | ||
| 描述： | 活性氧檢測試劑盒（Reactive Oxygen Species Assay Kit）利用熒光探針 DHE 進(jìn)行活性氧檢測。DHE 可自由透過活細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，在細(xì)胞質(zhì)中呈藍(lán)色熒光，被細(xì)胞內(nèi)的 ROS 氧化后形成氧化乙啶摻入染色體 DNA 中，使細(xì)胞核呈現(xiàn)明亮的紅色熒光。在激發(fā)波長 535nm，發(fā)射波長 610nm 附近，使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、 熒光分光光度計、熒光酶標(biāo)儀、流式細(xì)胞儀等檢測熒光強(qiáng)度，測定細(xì)胞內(nèi)活性氧水平。具有背景低、靈敏度高、線性范圍寬、使用方便等優(yōu)點，是一種快速簡便的組織或培養(yǎng)活細(xì)胞中 ROS 經(jīng)典檢測方法。 | ||
| 貨號 | 規(guī)格 | 價格 | 品牌 |
| G2706-1 | 0.2ml | 520 | GBCBIO |
| G2706-2 | 0.5ml | 960 | GBCBIO |
| G2706-3 | 1ml | 1580 | GBCBIO |
| 產(chǎn)品簡介： 活性氧檢測試劑盒（Reactive Oxygen Species Assay Kit）利用熒光探針 DHE 進(jìn)行活性氧檢測。DHE 可自由透過活細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，在細(xì)胞質(zhì)中呈藍(lán)色熒光，被細(xì)胞內(nèi)的 ROS 氧化后形成氧化乙啶摻入染色體 DNA 中，使細(xì)胞核呈現(xiàn)明亮的紅色熒光。在激發(fā)波長 535nm，發(fā)射波長 610nm 附近，使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、 熒光分光光度計、熒光酶標(biāo)儀、流式細(xì)胞儀等檢測熒光強(qiáng)度，測定細(xì)胞內(nèi)活性氧水平。具有背景低、靈敏度高、線性范圍寬、使用方便等優(yōu)點，是一種快速簡便的組織或培養(yǎng)活細(xì)胞中 ROS 經(jīng)典檢測方法。 產(chǎn)品特點： 適用范圍：貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、新鮮動物組織 工作波長：最佳激發(fā)波長 480-535nm，最佳發(fā)射波長 590-610nm 所需設(shè)備：流式細(xì)胞儀、熒光酶標(biāo)儀、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計等 儲存和穩(wěn)定性: -20℃避光凍存。本試劑盒自訂購之日起一年內(nèi)有效。 試劑盒組成: 貨號 G2706-1 G2706-2 G2706-3 DHE Solution(5mM) 0.2ml 0.5ml 1ml 說明書 1份 1份 1份 注意事項： 開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集于管底，避免開蓋時染液損失。 要設(shè)有無DHE孵育的對照，即不加探針，只用0.01M PBS重懸的細(xì)胞。 熒光探針標(biāo)記后，一定要洗凈殘余的未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的探針，以避免背景升高。多次清洗時注意操作規(guī)范，避免將細(xì)胞洗掉。 對于藥物處理（孵育）時間較短的細(xì)胞（2小時以內(nèi)、也有建議 4小時以內(nèi)），可以先用熒光染料進(jìn)行標(biāo)記，后用藥物刺激細(xì)胞后。對于藥物處理時間較長的細(xì)胞（超過 4 小時或 6 小時以上），建議先用藥物處理（刺激）細(xì)胞，后用探針標(biāo)記。 DHE 在光照和空氣中易被氧化，保存和操作中應(yīng)注意避光。 對不同的細(xì)胞和組織，應(yīng)選擇合適的孵育時間和濃度，以觀察ROS的變化。 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作 使用說明： 一、細(xì)胞樣本： A：收集細(xì)胞，進(jìn)行活性氧測定 1 細(xì)胞收集： 懸浮細(xì)胞：2000rpm，離心5min，收集沉淀，用 0.01M PBS 或無血清培養(yǎng)液洗滌2次，1000rpm，離心5min，棄上清，取細(xì)胞沉淀； 貼壁細(xì)胞：吸去培養(yǎng)液，用0.01M PBS 或無血清培養(yǎng)液反復(fù)吹打，使細(xì)胞層全部進(jìn)入PBS 或培養(yǎng)液中，收集細(xì)胞懸液，用0.01M PBS 或無血清培養(yǎng)液洗滌2次，1000rpm，離心5min，棄上清，取細(xì)胞沉淀； 2 加入DHE探針：用稀釋好的 DHE熒光探針重懸細(xì)胞沉淀，一般情況下，細(xì)胞密度要求1*106-2*107/ml，推薦探針初始工作濃度為10 μM（DHE 工作濃度可在 1μM~100 μM 范圍內(nèi)，需進(jìn)行預(yù)實驗確定最適濃度）。 3 37 ℃孵育細(xì)胞10-90分鐘。通常情況下，10-30分鐘即可。 注意：孵育時間長短與細(xì)胞類型、刺激條件、DHE 濃度等有關(guān)。可以每隔5min顛倒混勻一下，使探針與樣本充分接觸。 4 1000g，離心5min，去上清收集細(xì)胞沉淀，用 PBS 緩沖液洗滌 2 次，重懸細(xì)胞。 5 進(jìn)行熒光檢測，以熒光度數(shù)值表示結(jié)果。 B：不收集細(xì)胞，直接將探針加入培養(yǎng)基測定
1. 加入DHE探針：去除細(xì)胞培養(yǎng)基上清，加入用無血清培養(yǎng)液稀釋好的 DHE 探針（推薦探針終濃度為 10 μM），加入探針的體積以能蓋住細(xì)胞為宜，通常 6 孔板單孔不少于 500 μl。 2. 37℃孵育細(xì)胞10-90分鐘。通常情況下，10-30 分鐘即可。 注意：孵育時間長短與細(xì)胞類型、刺激條件、DHE 濃度等有關(guān)。可以每隔 5min 顛倒混勻一下，使探針與樣本充分接觸。 3. 棄去上層培養(yǎng)液，用無血清培養(yǎng)液或0.01M PBS反復(fù)吹打，使細(xì)胞層全部進(jìn)入PBS或培養(yǎng)液中。 4. 收集細(xì)胞懸液，用 0.01M PBS 或無血清培養(yǎng)液洗滌 2 次，去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的探針，1000rpm，離心5min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀，用PBS緩沖液洗滌2次，重懸細(xì)胞。 5. 進(jìn)行熒光檢測，以熒光度數(shù)值表示結(jié)果。 二、動物組織樣本
1. 細(xì)胞懸液制備：可采用單細(xì)胞懸液制備儀或傳統(tǒng)的組織處理方法如：酶解法、研磨法等制備單細(xì)胞懸液； 2. 加入DHE探針：去除細(xì)胞培養(yǎng)基上清，加入用無血清培養(yǎng)液稀釋好的 DHE探針（推薦探針終濃度為 10 μM）。 3. 37℃孵育細(xì)胞10-90分鐘。通常情況下，10-30分鐘即可。 注意：孵育時間長短與細(xì)胞類型、刺激條件、DHE 濃度等有關(guān)。可以每隔 5min 顛倒混勻一下，使探針與樣本充分接觸。1000g，離心5min，去上清收集細(xì)胞沉淀，用PBS緩沖液洗滌2次，重懸細(xì)胞。 4. 進(jìn)行熒光檢測，以熒光度數(shù)值表示結(jié)果。 |