產(chǎn)品簡介

GBCBIO公司的血凝塊DNA提取試劑盒可一次性地處理200mg左右的血凝塊，血凝塊無需研磨，直接加裂解液消化，在30分鐘內(nèi)完成單個或多個樣品的操作。該試劑盒不需要酚氯仿抽抽提，或者耗時的操作（如異丙醇沉淀）。使用該試劑盒提取到的DNA可以用于PCR，Southern雜交，酶切消化等實驗。

試劑盒組成

      *Protease K含有50%甘油，吸取時，移液器不能伸得太入，以免吸頭外壁帶走Protease K

儲存和穩(wěn)定性

Blood Clot DNA Kit在購買后按以下方式儲存可保存至少12個月；Protease K儲于-20℃，其它組成儲于室溫（22-25℃）。BL在低溫下可能會出現(xiàn)沉淀，加熱到37℃溶解沉淀。

實驗前準備

請詳細閱讀該手冊并熟悉各個步驟，在開始之前準備好所有的試劑盒組分和必需的器材。

濃縮的DNA Wash Buffer需用無水乙醇按如下稀釋：

D1111 加8 ml；D1115加入52 ml ；D1116加入104 ml 無水乙醇

濃縮的Buffer WB需用無水乙醇按如下稀釋：

D1111 加2 ml；D1115加入14ml ；D1116加入28ml，D1117加入56ml 無水乙醇

操作步驟

注意：以下方案適用200mg血凝塊的操作方案，更大體系按比例增加相關(guān)溶液的用量。DNA Wash Buffer提供的濃縮液，需按前面的說明進行稀釋。

1.        取200mg的血凝塊于2ml的離心管中。

2.        加入20μl Protease K(20mg/ml)和400μl Buffer BL，最高速度渦旋15秒充分混勻。如果需要得到無RNA的基因組DNA，每個樣品加入5μl RNA酶（10mg/ml，需另購買，GBCBIO貨號P3414）。

3.        70℃水浴直至血凝塊完全消化（一般情況下，10-20min即可）。孵育過程中顛倒混勻幾次。

4.        加入250ul無水乙醇（96-100%，室溫）至裂解液中，最高速度渦旋20秒混勻，稍微離心以收集蓋子上的液滴（可不離心）。

5.        把GBC吸附柱裝在在2ml收集管中（已提供），將第4步得到的溶液全部轉(zhuǎn)入柱中，10,000×g離心1min，倒棄流出液重新套上收集管。

6.        加入500μl Buffer WB至柱子中，10,000×g離心1min，棄去流出液。

注意：Buffer WB使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中，使用前須恢復(fù)到室溫。

7.        將GBC吸附柱重新套回2ml收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；

注意：DNA Wash Buffer使用前須要用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中，使用前須恢復(fù)到室溫。

8.        再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g離心1min,棄去流出液；

9.        將GBC吸附柱重新套回2ml收集管中，最大轉(zhuǎn)速（>13.000×g）離心空結(jié)合柱1min以干燥柱子的基質(zhì)；這一步對下面的洗脫步驟至關(guān)重要。

10.      將柱子置于1.5ml滅菌離心管，加入30-80μl 65℃預(yù)熱的TE或滅菌去離子水至柱子的膜中央。 室溫靜置于5min；

11.      室溫下，離心(>13.000)1min，以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。注意：為增加基因組DNA的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱中，室溫放置2分鐘，1,2000rpm離心2分鐘。洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50μl，體積過小影響回收效率。洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。