一。介紹：

本核酸酶抑制劑復(fù)合物為多成分的復(fù)合制劑，與表面活性劑的協(xié)同作用下，能夠快速滲透到細(xì)胞內(nèi)，比傳統(tǒng)方法更能快速地幫助抑制劑與細(xì)胞內(nèi)的核酸酶結(jié)合，從而實現(xiàn)快速穩(wěn)定核酸，防止降解。本核酸酶抑制劑復(fù)合物為專利產(chǎn)品，已為好幾大病毒保存液廠家所采用，能夠提供產(chǎn)品的競爭力，也能有效降低目前市場上異硫氰酸緊缺的影響。

二，實驗測試：

通過對比含150g/L本核酸酶抑制劑復(fù)合物的保存液，與傳統(tǒng)3M異硫氰酸胍配方的保存液保存假病毒核酸穩(wěn)定性，來評價本核酸酶抑制劑復(fù)合物的有效性。

1. 制備保存液

2.實驗流程

假病毒核酸制備：用咽拭子在正常人口腔采樣后，用4ml生理鹽水浸泡拭子，劇烈渦旋1min后丟棄拭子，加入100ul新冠假病毒（滴度108）渦旋混勻。取200ul含假病毒的拭子浸泡液加入到1ml上述配制的保存液（第一組及第二組）離心管中，混勻后于室溫保存。于24h、72h、120h后分別取200ul保存液用GBCBIO公司的Virus DNA/RNA Kit進(jìn)行核酸提取，最后用100ul RNase-free Water洗脫。核酸提取完后采用疾控中心推薦的引物即進(jìn)行qRT-PCR檢測。

3.結(jié)果

保存24h后保存液1-11   ORF1ab基因的擴(kuò)增曲線與CT值29.668 ；29.207 ；26.496 ；24.534；23.863；24.395；34.504；33.191；32.559；32.316；34.816

保存24h后保存液 1-11 N基因的擴(kuò)增曲線與CT值27.832；25.488；24.684；24.707；24.293；24.637；34.934；33.848；33.543；30.785；35.090

保存72h后保存液1-11   ORF1ab基因的擴(kuò)增曲線與CT值30.887；30.730；29.973；24.887；25.918；27.855；33.777；31.918；31.598；31.402；33.988

保存72h后保存液 1-11 N基因的擴(kuò)增曲線與CT值 31.660；30.746；28.582；25.699；26.855；28.613；34.137；32.910 ；32.309；31.879；36.434

保存120h后保存液1-11   ORF1ab基因的擴(kuò)增曲線與CT值

32.746；32.230；31.918； 30.074；30.246；26.316；33.902；33.293；33.176；31.918 ；35.887

4.結(jié)論

使用本核酸酶抑制劑復(fù)合物的保存液在低至0.1M異硫氰酸胍時比傳統(tǒng)配方的3M異硫氰酸胍的效果還要好，如果用150g/L復(fù)合物與0.5M異硫氰酸胍就顯著優(yōu)于傳統(tǒng)配方。

三、滅活病毒效果測試

用HSV-1與EV71病毒來測試保存液對病毒的滅活效果，測試顯示使用低至0.5M異胍與150g/L的核酸酶抑制劑復(fù)合物能夠有效滅活病毒。